HBV RNA上La Protein结合位点的缺失对自身稳定性的影响
目的 研究乙型肝炎病毒(HBV)DNA上的突变所造成HBV RNA上La protein结合位点的缺失对HBV RNA在宿主细胞内稳定性的影响,评价HBV DNA上这个位点对HBV生命周期的重要性,从而寻找新的抗HBV靶点. 方法 应用PCR,分子克隆和定点突变技术,针对La protein与HBV RNA结合的相关位点,构建缺失了La protein结合相关位点的HBV突变载体,命名为pHBV-mLa;通过计算机预测突变后,这段序列所在的HBV RNA片段的二级结构;应用脂质体将未突变的HBV载体和HBV突变载体分别瞬时转染入HepG2细胞株中;半定量RT-PCR检测HBsAg mRNA和HBeAg mRNA,ELISA检测HBsAg和HBeAg表达情况. 结果 酶切鉴定和碱基测序证明,成功构建了La protein结合相关位点部分碱基缺失的HBV突变载体--pHBV-mLa;突变后的HBV RNA二级结构同突变前的比较,完全改变;转染后半定量RT-PCR检测,发现突变后HBV HBsAg mRNA和HBeAg mRNA水平均明显降低,ELISA检测发现突变引起HBsAg和HBeAg表达下调. 结论 由于HBV DNA上的人工突变,所引起的HBV RNA上La protein结合位点相应的改变,使得HBV RNA特殊的二级结构改变,导致La protein与HBV RNA结合松弛、解离,无法保护HBV RNA(HBsAg mRNA和HBeAg mRNA),RNA酶就可以引起HBV RNA的降解,从而使HBV RNA水平降低,影响HBV各种蛋白的表达.本实验表明,在HBV DNA上,这个位点碱基序列的保守性使HBV RNA可以形成特殊的二级结构,这个结构影响着HBV RNA在宿主细胞内的稳定性,所以HBV DNA上这个位点的存在和保守对HBV生命周期至关重要.
乙型肝炎病毒 DNA突变 结合位点 抗病毒靶点
林园园 林菊生 王晓燕 谢娜 周秀敏 宋宇虎
武汉,华中科技大学同济医学院附属同济医院肝病研究所,430030
国内会议
大连
中文
122-127
2006-05-11（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）