干扰素α1b突变体的高效表达、纯化及生物学活性研究
目的:构建高效表达的干扰素α1b突变体菌株和开发其纯化工艺,研究干扰素α1b突变体的抗细胞增殖活性和促NK细胞杀伤活性. 方法:用PCR定点突变技术将重组干扰素α1b第86位的半胱氨酸突变为天冬氨酸,得到干扰素α1b的突变基因,并克隆到表达载体pET9a中;在大肠杆菌JM109(DE3)中以包涵体形式实现了干扰素α1b突变体的高效表达;干扰素α1b突变体经过包涵体变复性和S-Sepharose、SephacrylS-100纯化后,用MTT法检测其对三种肿瘤细胞(HL-60、K562、Raji)的生长抑制作用和其促NK细胞杀伤活性. 结果:干扰素α1b突变体蛋白在发酵培养中表达量可达109IU/L,纯化后纯度达到了99﹪,干扰素α1b突变体对三种肿瘤细胞的生长抑制作用较干扰素α1b有显著的提高,促NK细胞杀伤活性二者一致. 结论:采用S-Sepharose离子交换层析替代传统的单抗亲和层析也获得了很高的纯度,干扰素α1b突变体的抗细胞增殖活性显著提高,有希望成为新型的干扰素治疗剂.
干扰素α1b突变体 蛋白纯化 抗细胞增殖活性 促NK细胞杀伤活性 纯化工艺 肿瘤细胞
徐帆洪 陈仰权 童葵塘
上海生物制品研究所,上海,200052
国内会议
昆明
中文
81-84
2005-10-01（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）