禽呼肠孤病毒分子生物学检测技术的建立
快速准确地检测禽呼肠孤病毒(ARV)是有效防治该病的前提,近年来国内外报道有关ARV的检测方法很多,本研究为了探索快速检测ARV的方法,通过细胞培养、鸡胚接种、动物攻毒和反转录-聚合酶链式反应(RT-PCR)方法,其中细胞培养的细胞变圆、脱落、聚集成团.鸡胚接种出现广泛皮下出血而呈紫黑色,卵黄囊出现白色的痘斑;动物攻毒未成功,不能复制出与本病相似的症状.本研究根据相关文献报道的ARVS1133的S1基因的序列,设计合成了一对引物,进行RT-PCR可扩增出大小为1022bp的目的片段,建立了一种快速检测ARV的RT-PCR方法.然后进行了特异性试验,该RT-PCR方法可以扩增出ARVS1133疫苗株及两份阳性病料的目的片段,而在无特定病原(SPF)鸡胚尿囊液、鸡新城疫病毒、传染性法氏囊病毒、大肠杆菌、葡萄球菌、巴氏杆菌的RNA中却扩增不出目的片段来,证明该方法是特异的.并进行了敏感性试验,该方法可从100倍稀释量的ARVeDNA模板(55ng)中扩增出1022bp的目的片段来.应用这对引物对来自玉林、南宁的20多份病料的跗关节等组织抽提的核酸进行RT-PCR方法扩增,结果仅从两份病料扩增到与预期目的片段大小一致的产物来,而其他病料的扩增均为阴性.结果说明用该方法可快速测出ARV,为检测、诊断ARV提供了很好的方法.
禽呼肠孤病毒 细胞培养 反转录-聚合酶链反应 特异性试验 敏感性试验 分子生物学检测
李海滨 韦平
国内会议
海口
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606-615
2005-12-01（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）