睾丸内注射和体内电穿孔法建立转基因小鼠的实验研究
目的为了探讨将外源基因注射到在体睾丸生精小管内并进行体内电穿孔以建立转基因动物的可行性.方法我们对真核表达质粒pCE-29DNA进行了2种不同的处理:(1)DNA+invivojetPElTM转染试剂+台盼蓝;(2)DNA+台盼蓝.然后将这两种不同处理的目的DNA分别注射到四组SPF级雄性KM小鼠睾丸生精小管内,其中注射有DNA+转染试剂+台盼蓝的2组动物中一组进行体内电穿孔,另一组则不进行体内电穿孔;注射有DNA+台盼蓝的2组动物也进行同样的处理.处理2周后的各组SPF级雄性KM小鼠分别与超排处理的SPF级雌性KM小鼠合笼交配,直至妊娠产仔.从各组中随机取20只新生仔鼠并提取其尾部基因组DNA进行PCR-Southern检测,以确定四种不同的处理后外源基因的整合和表达的效率.结果经检测显示:不同处理组之间其外源基因的转染效率存在显著差异,其中A组外源基因的整合率最高(25﹪)、C组的整合率为10﹪、B组的整合率为5﹪;D组的整合率最差(0﹪).结论将与高效转染试剂孵育的外源基因注射到睾丸生精小管内,并结合体内电穿孔技术可以显著地提高外源基因在精原干细胞或其它生精细胞的转染效率.因此,本实验建立了一种简便可行、高效的生产转基因动物新方法.
睾丸内注射 体内电穿孔 转基因小鼠
袁进 安靓 顾为望 黄吴健
南方医科大学实验动物中心 南方医科大学组织胚胎学教研室,广州,510515
国内会议
海口
中文
195-201
2005-12-01（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）