EHEC O157∶H7志贺样毒素Ⅱ结合亚单位 Stx2B的基因克隆、表达与纯化
目的：克隆表达肠出血性大肠杆菌(EHEC)O157∶H7志贺样毒素B亚单位(Shigaliketoxin,Stx2B),并对其初步纯化. 方法：设计引物采用PCR法自EHECO157∶H7基因组扩增志贺样毒素B亚单位的编码基因stx2b,T-A克隆后构建原核表达质粒pET-22b(+)-stx2b,经测序鉴定后转化E.coliBL21(DE3),IPTG诱导表达,以Tricine-PAGE和Westen-blotting分析目的蛋白的表达,并采用固相镍离子亲和层析纯化重组蛋白. 结果：扩增的stx2b基因约210bp;原核表达质粒pET-22b(+)-stx2b经酶切和测序鉴定与预期序列一致;并在E.coliBL21(DE3)中得到高效可溶性表达,蛋白表达率约30﹪;PAGE初步测定目的蛋白的相对分子质量(Mr)约7×103;经固相镍离子亲和层析纯化后,蛋白纯度可达90.1﹪. 结论：EHECO157∶H7志贺样毒素B亚单位的高效表达与初步纯化,为进一步的生物学性质研究奠定了基础.
肠出血性大肠杆菌 志贺样毒素B亚单位 基因克隆 原核表达 重组蛋白纯化
马颖 毛旭虎 邹全明
第三军医大学临床微生物学及免疫学教研室,重庆,400038
国内会议
长沙
中文
368-373
2005-10-01（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）