应用PCR-CE-RFLP方法快速诊断女性生殖道细菌的研究
目的：应用PCR-CE-RFLP方法直接检测女性生殖道标本中的细菌,为临床诊断提供快速、准确的依据,并逐步开发检测泌尿生殖道感染菌的基因芯片,用于临床诊断. 方法:利用细菌16SrRNA集保守性和变异性于一身的特点,合成一对通用引物,其上游5”端用5”-FAM标记.将8株已知菌株和38例临床诊断为生殖道炎症的女性生殖道拭子标本及其培养物进行PCR扩增,扩增产物经限制性内切酶HaeⅢ消化,然后进行毛细管电泳,通过限制性片断长度多态性(Restriction-Fragment-LengthPolymorphism,RFLP)分析来鉴定不同病原菌. 结果:①已知菌株PCR扩增阳性率为75﹪(6/8)、毛细管电泳阳性率为100﹪(6/6).②生殖道感染的标本pCR扩增阳性率为79﹪(30/38),毛细管电泳阳性率为100﹪(30/30).③已知菌株PCR扩增产物的5”端HaeⅢ完全酶切片段的毛细管电泳结果,与电子克隆产物的酶切片段基本一致.④用传统培养检测法在生殖道常见的致病菌中,可检出有大肠埃希菌、金黄色葡萄球菌、表皮葡萄球菌、肺炎克雷伯菌和鲍曼不动杆菌,本实验用PCR-CE-RFLP法同样也能检测出来.⑤本实验还发现数种传统培养法未检出的细菌(即未定菌). 结论:PCR-CE-RFLP法比传统的细菌培养法具有快速、准确、灵敏的优点,比传统方法缩短20小时,可用于临床标本的直接鉴定.
女性生殖道细菌 PCR 毛细管电泳 限制性片断长度多态性 原始标本 基因芯片 免疫诊断 病原菌鉴定
李琳 张卓然 李坤 韩英 王敏杰 潘峰
大连市妇产医院,大连,116021 大连医科大学,大连,116027 大连大学医学院,大连,116022
国内会议
长沙
中文
267-274
2005-10-01（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）