一种新的截短的HSV-ⅡgD重组抗原的制备及特异性鉴定
目的；克隆表达一种自行设计的截短的单纯疱疹病毒Ⅱ型(HSV-Ⅱ)gD(gDt)特异性抗原片段,并验证该抗原的特异性. 方法：从感染的HSV-Ⅱ细胞上清液中提取病毒DNA,根据Genbank中的HSV-ⅡgD基因序列设计引物通过PCR扩增gDt编码区DNA,并将其克隆到pGEM-T载体中测序,然后在含有谷光甘肽转移酶(GST)融合蛋白表达载体pGEM-4T中表达,表达产物经GST亲和层析柱纯化后,采用免疫印迹法和ELISA法进行特异性鉴定. 结果；经测序证明克隆的gDt基因序列正确,并在pGEM-4T中得到了高效表达.表达的融合蛋白用亲和层析柱纯化后经免疫印迹法鉴定具有良好的抗原性.用该抗原包被板进行间接ELISA试验检出临床确定诊断的20例患者血清中含有gD抗体,而阴性对照组均为阴性.同时以HSV-Ⅱ全病毒抗原和全病毒裂解纯化后的包膜蛋白作为对照,其敏感性和特异性均高达95﹪以上. 结论；通过基因工程制备的重组gDt特异性蛋白具有较强的特异性,这将为HSV-Ⅱ感染者的早期临床诊断提供有用的工具.
单纯疱疹病毒Ⅱ型 重组抗原制备 克隆表达 gD抗原 酶联免疫吸附测定 免疫诊断
蔡亦红 王明丽
安徽医科大学微生物教研室,合肥,230032
国内会议
长沙
中文
164-169
2005-10-01（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）