重组N蛋白抗原检测PRRSV抗体ELISA的研究Ⅰ.ELISA方法的初步建立及其标化
以纯化的重组N蛋白作为包被抗原,对各种条件进行优化(如抗原的包被,作用时间及底物的选择),建立了检测PRRS抗体的间接ELISA方法.研究结果表明,重组抗原最适包被浓度为1ng/μL,最适包被条件为4℃过夜,血清稀释度为1∶40,待检血清和酶标二抗的反应时间分别为37℃30分钟和40分钟,底物用TMB溶液,37℃显色10分钟.本研究创造性地对ELISA板的蛋白稳定剂、血清稀释液的显色系统和终止液进行了研究.用全病毒进行阻断试验结果表明,全病毒能够阻断阳性血清与包被重组N蛋白抗原的结合反应;此外用此方法对几种繁殖障碍性疾病的阳性血清进行检测,均为阴性,无交叉反应,说明建立的ELISA具有很好的特异性.板内和板间重复性试验结果为同一份血清板内各孔的变异系数和板间各次的变异系数均小于7﹪,说明本方法的重复性好.
猪繁殖呼吸综合征病毒 ELISA法 重组N蛋白抗原检测 PRRSV抗体检测 血清检测
吴延功 许立华 陈溥言 徐天刚 王志亮 张喜悦 王君玮 宋翠平 刘佩兰 徐培莲 宋芳
农业部动物检疫所,青岛,266032 南京农业大学动物医学院,南京,200095
国内会议
长沙
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681-693
2005-10-01（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）