检测猪圆环病毒DNA的竞争定量PCR方法的建立及初步应用
本研究建立了定量检测猪圆环病毒DNA的竞争PCR方法.应用PCR扩增PCV-20RF2上490bp片段P3P4,隆到pMD18-T载体获得目标模板.构建含692bp的C-P3P4DNA片段的竞争模板,其携带与目标DNA和靶DNA相同的引物结合区.以定量的竞争模板同一系列稀释的竞争模板进行竞争PCR扩增,以产物的荧光强度(IOD)绘制标准曲线,结果当反应体系中起始模板的量为1.0×107Cop/ul,循环次数小于或等于30时,原始模板数以指数增长.由此确定目标摸板和竞争模板的最适工作浓度并用该方法检测感染细胞内的PCV-2基因组的拷贝数和临床样品中的PCV-2DNA含量,结果发现临床样品中的PCV-2DNA含量达到一定程度(肺中1.0145×108Copies/ml,血中0.8×107copies/ml,淋巴中9.698×108copies/ml),猪表现临床症状,而病毒在感染细胞内的复制在80h基因组的拷贝数达到最高,这为今后的研究奠定了基础。
猪圆环病毒DNA检测 竞争定量PCR扩增 临床症状 猪系统衰竭综合征 免疫荧光试验 核酸探针
蔡阳 崔尚金 童光志
中国农业科学院哈尔滨兽医研究所疫病诊断与流行病学中心,哈尔滨,150001;兽医生物技术国家重点实验室,哈尔滨,150001
国内会议
长沙
中文
618-624
2005-10-01（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）