鸡大肠杆菌1型菌毛蛋白结构基因(pil A)表达载体构建及表达产物免疫原性
根据发表的鸡大肠杆菌1型菌毛pilA基因序列,在其同源区设计合成了一对引物,经PCR扩增,从鸡大肠杆菌GL7分离株(O78)染色体扩增到大小约551bp的DNA片段,用限制性内切酶SalⅠ和BamHⅠ同时酶切所扩增的外源基因片段和pET-32a(+)载体,再将酶切产物连接,并将连接产物转化到受体菌DH5α中.经SalⅠ和BamHⅠ双酶切、鉴定、筛选到重组质粒F15pilA/pET-32a(+).再将此质粒转化至宿主菌BL21(DE3)中,筛选获得重组菌株BL21(DE3-F15pilA/pET32a(+)).经IPTG诱导,用SDS-PAGE检测表达产物,结果表明重组蛋白的大小与理论数据大小符合.用间接ELISA和Westernblot也再次证实表达产物为菌毛蛋白.用提取的重组菌毛蛋白制成油乳剂疫苗,免疫3周龄健康罗曼小公鸡,每雏皮下注射0.5ml(含表达蛋白200μg).隔离饲养至7周龄,分别用同源菌株GL7(O78)和YR10(O18)经后胸气囊攻毒,同时设未免疫攻毒对照.结果表明,O78和O18免疫攻毒组死亡率为16.7﹪和27.3﹪;O78和O18的未免疫攻毒对照组死亡率分别是83.33﹪和91.67﹪.免疫鸡在气囊、心包及肝脏的病理变化比非免疫鸡显著轻微.结果表明鸡大肠杆菌1型菌毛pilA基因表达产物制成灭活油乳剂疫苗免疫鸡体具有良好的免疫原性.
鸡大肠杆菌病 大肠埃希氏菌 1型菌毛 pilA基因 基因表达产物 灭活疫苗 免疫原性
戴鼎震 甘黎明 冯秀丽 刘洪珍 王晓丽 夏兴霞
江苏省农业科学院兽医研究所,南京,210014 南京农业大学动物医学院,南京,2100014 盐都县兽医站,盐都,224055
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2005-11-22（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）