长期培养的大鼠原代肝细胞功能和形态学观察
本研究的目的是研究大鼠原代肝细胞长期体外培养后功能和形态的变化.方法：采用两步胶原酶原位灌流法分离大鼠肝细胞,并用Percoll分离液进行密度梯度离心进一步纯化肝细胞,采用0.4﹪台盼蓝染色观察细胞活力.然后将细胞接种于HepatoZYME-SFM培养基中培养,定期收集肝细胞培养液上清检测丙氨酸氨基转移酶(ALT)、天门冬氨酸氨基转移酶(AST)、白蛋白、尿素氮的水平.采用乙氧基试卤灵O-脱乙基酶活性(EROD)方法检测肝细胞P450的CYPⅠA1功能.利用高效液相色谱法分析安定代谢实验.结果：新鲜分离的大鼠肝细胞总数(2-3)×108cells/wholeliver,Percoll分离液纯化后活力和纯度在90﹪以上.HepatoZYME-SFM培养下肝细胞生长良好并保持正常形态.AST、ALT水平在培养3天后下降显著,6-9天后趋于相对稳定的低水平.白蛋白的分泌功能、尿素合成能力在18天内维持在较高水平.可在3-6天检测到CYPⅠA1酶活性.在2-5天内可有效观察到安定的清除.结论：Percoll液纯化新分离肝细胞可提高其活率和纯度,HepatoZYME-SFM培养条件下肝细胞可有效保持良好形态结构和一定的生物合成代谢能力,适合肝细胞的体外长期培养和功能研究.
肝细胞 细胞培养 形态学
庄鹏 江元森 马会慧 李志刚 麦丽 杨林 姚集鲁
中山大学附属三院传染科,广州,510630
国内会议
苏州
中文
367-374
2005-03-01（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）