大鼠脑源性神经营养因子基因T载体的构建及鉴定
目的：利用T载体完成大鼠脑源性神经营养因子(BDNF)基因PCR产物的克隆. 方法：250g左右SD大鼠,TRIzol试剂(美国invitrogen公司),DEPC(焦碳酸二乙酯),氯仿、异丙醇、无水乙醇均为国产分析纯,M-MLV逆转录酶,BDNF上、下游引物,ExTaq酶(日本TAKARA公司),DH5α菌种为本实验室保存,E.Z.N.A质粒抽提试剂盒I(美国Omega公司),pMD18-T载体等,QIAquick胶回收试剂盒(德国QIAGEN公司),X-gal和IPTG(美国Promega公司);首先提取大鼠脑组织总RNA,然后利用MMV逆转录酶及oligo-dT引物逆转录合成cDNA第一条链,再利用exTaq酶及BDNF上、下游引物扩增出BDNFcDNA,最后利用T4连接酶将BDNF基因克隆入T载体用于下一步测序及其他克隆. 结果：成功构建了BDNF基因T载体,经双脱氧链终止法测序证实为大鼠BDNF基因。
脑源性神经营养因子 基因克隆 PCR 脊髓损伤 基因T载体
沈慧勇 王鹏 吴燕峰 唐勇 黄霖 杨睿
中山大学第二附属医院,骨科,广州,510120 中山大学第二附属医院,脐血库,广州,510120
国内会议
重庆
中文
8-10
2005-09-01（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）