成年动物肝细胞基本培养法筛选暨其胆红素代谢活性实验
鉴于新生动物肝细胞与胚胎肝细胞的生物个体发育期短,生物酶代谢系统尚未成熟与稳定，本文探讨了成年动物肝细胞基本培养法和胆红素代谢、尿素合成等生物活性,以替代前者成为EBLSS更理想生物材料的可能性.方法：(1)以简单的三类基本成分:合成培养基、血清、胰岛素对成年小白鼠肝细胞作15种组合(1mm3肝组织块、0.05mm3肝组织微块、机械分离法、胶原酶分离法、高密度法、低密度法、DMEM、RPMI-1640、William-s、无胰岛素、灭活胎牛血清、无胎牛血清、灭活鼠血清、未灭活鼠血清、肝素化鼠血浆)培养观察.(2)用人体重型肝的高胆红素血清培养肝组织微块、刚分离的肝细胞、预培养24h的肝细胞,贝克曼全自动分析仪检测,观察对胆红素代谢、尿素合成活性.结果：含20﹪同种异体雄性小白鼠灭活血清、10U/ml胰岛素的高糖型DMEM培养基作高密度培养时,50﹪的细胞成活率在笫10天,第14天时仍有20﹪的存活率;预培养24h的单层肝细胞对胆红素代谢活性最强,更换培基为胆红素血清后3h使总胆红素、直接胆红素、间接胆红素各下降28.88﹪、21.13﹪、33.63﹪,与其他二组对照P＜0.05.结论：含20﹪同种异体雄性血清、10U/ml胰岛素的高糖型DMEM培养基可作为成年动物肝细胞的基本培养基;此条件下的高密度培养是延长成年动物肝细胞体外存活期的重要因素;单层预培养24h的成年动物肝细胞对人体胆红素的代谢活性很强,尿素合成功能良好;成年动物肝细胞有较成熟与稳定的代谢酶系统,可替代新生动物或胚胎动物肝细胞,可能成为EBLSS更理想的生物材料.
肝细胞 存活期 胆红素 EBLSS 生物材料
黄永清 陈南清 黄庆山 孙家敏 吴志勇
福建省龙岩市第二医院
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2005-03-01（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）