斑马鱼作为抗肿瘤海洋药物研究模型:Ⅰ,胸腺苷酸合成酶基因的克隆表达
胸腺苷酸合成酶(Thymidylatesynthase,简称TS)催化dUMP生成dTMP和二氢叶酸,dTMP再进一步转化为dTTP,后者是DNA合成的重要前体,多年来TS一直作为癌症化疗的一个重要靶点,斑马鱼作为一种重要的模式生物,已成功用于多种药物筛选模型的构建,但斑马鱼TS的基因序列与功能尚未见报道.本研究采用RT-PCR和RACE方法,从斑马鱼胚胎中克隆出TS的cDNA全长序列,分析表明它的编码序列含有954个核苷酸,编码一个318个氨基酸的蛋白序列,分子量为36kD.为了研究斑马鱼TS蛋白的性质,将该cDNA序列与表达载体pET-28连接,构建表达载体pET-28/Z-TS,并在大肠杆菌BL21(DE3)中进行诱导表达,纯化后获得了高纯度的均一性TS蛋白.酶学分析表明斑马鱼TS蛋白在28℃表现出比较高的生物活性,Km值与人等生物的TS蛋白比较接近.
斑马鱼 胸腺苷酸合成酶 克隆表达 催化活性 抗肿瘤药物 海洋药物
杜长青 牛荣丽 张培军 林秀坤
中国科学院海洋研究所,青岛,266071;中国科学院研究生院,北京,100039 中国科学院海洋研究所,青岛,266071
国内会议
厦门
中文
730-736
2005-08-01（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）