海湾扇贝大防御素基因的克隆、表达及其重组产物的抑菌活性分析(摘要)
抗菌肽是自然界中广泛存在的具有抗菌效应的分子,是机体非特异性免疫的关键因子之一.通过EST分析和锚定PCR技术,从海湾扇贝中克隆得到一种大防御素基因的全长cDNA序列,该基因的cDNA全长563bp,编码123个氨基酸.BLASTx分析的结果显示它与马蹄蟹大防御素的相似性最高,在其编码的氨基酸序列中发现8个保守的半胱氨酸与马蹄蟹和文昌鱼的大防御素相一致.结合BLAST分析的结果,可以确认所获得的cDNA序列是一种在软体动物中首次报道的大防御素的编码序列.采用实时定量PCR技术在鳗弧菌感染前后的海湾扇贝血细胞中均可以检测到该基因的表达,但病原刺激前的表达水平很低,病原刺激后4h起表达开始升高,并在32h达到最高,72h开始逐渐下降,该结果表明海湾扇贝大防御素存在组成型和诱导型两种调控机制,在扇贝防御病原感染的过程中发挥着重要作用.为了进一步研究该海湾扇贝大防御素的抗菌活性及其免疫功能,将其成熟肽编码区克隆到巴斯德毕赤酵母分泌型表达载体pPIC9K中,构建重组表达质粒pPIC9K-BD,经SacI酶切线性化后,采用PEG方法转化毕赤酵母宿主菌GS115获得阳性克隆.阳性克隆经G418筛选获得多拷贝重组子,0.5﹪甲醇诱导表达发现重组海湾扇贝大防御素在α因子的引导下,分泌到培养基中,表达产物在分子量10K处有一条特异性的条带.抑菌试验显示重组产物具有广谱抗菌活性,不仅对革兰氏阳性菌和革兰氏阴性菌有抑菌作用,其对真菌也表现出了较强的抗菌活性,本实验结果为进一步认识海湾扇贝的免疫防御机制,研制新型的具有抗微生物活性的药物奠定了基础.
海湾扇贝 大防御素基因 基因克隆 重组表达 抗菌活性 抗菌肽
赵建民 宋林生 李成华 吴龙涛
中国科学院海洋研究所实验海洋生物学开放实验室,青岛,266071
国内会议
厦门
中文
446
2005-08-01（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）