抑制差减杂交筛选辐射致癌差异表达基因
目的:筛选研究辐射诱发小鼠肿瘤相关差异表达基因.方法:以60Coγ射线照射诱发的小鼠白血病动物模型为研究对象,解剖分别获取小鼠胸腺肿瘤组织和正常胸腺组织并抽提及浓缩mRNA,以照射组小鼠胸腺肿瘤组织样本为Tester,以正常组胸腺组织样本为Driver,先采用抑制差减杂交得到差异片段,然后与pUCm-T载体进行标准连接反应,连接产物转化大肠杆菌DH5α感受态细胞(氯化钙法),构建辐射致癌差异表达基因cDNA文库,鉴定后挑取阳性克隆测序,并与GeneBank数据库进行同源性比对分析.结果:抑制差减杂交筛选得到102个阳性克隆,其中白色克隆102个,占82.3﹪;从白色克隆中随机挑选30个克隆进行菌液PCR,扩增得到28个特异性插入片段,大小介于500～1000bp之间,与SSH设计预期的插入片段大小相符:该28个阳性克隆的DNA测序结果经与GeneBank数据库比对发现代表了24个已知基因,其中3个为重复检出基因,暂未发现有未知序列基因.结论:成功建立了辐射致癌差异表达基因的cDNA文库,初步筛选获得了24条表达上调的差异片段,其中相当数量的基因涉及细胞的增殖、粘附、信号转导等与肿瘤发生发展密切相关的因素,这一结果将有助于充实完善辐射致癌的分子机制.
抑制差减杂交 辐射致癌 差异表达 cDNA文库
熊杰 韩玲 朱丹 高建国
第二军医大学海军医学系放射医学教研室,上海,200433
国内会议
昆明
中文
99-101
2005-10-01（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）