MDR1启动子控制双自杀基因系统的建立及其在耐药胶质瘤细胞中特异性表达的初步研究
目的：从耐药胶质瘤C6/ADR细胞中克隆多药耐药基因启动子(Pmdr1),构建Pmdr1控制的双自杀基因表达载体,并初步研究其在C6/ADR中的表达情况.方法：取对数生长期C6/ADR细胞,提取基因组DNA,利用引物PCR扩增Pmdr1,克隆入T载体,利用NdeI/HindⅢ双酶切反应,用Pmdr1置换pcDNA3.TK中的CMV启动子,获得pcDNA3.Pmdr1.TK,酶切及测序鉴定;BamHI酶切pcDNA3.Pmdr1.TK及pcDNA3.CD.TK,将pcDNA3.CD.TK中的CD基因插入到pcDNA3.Pmdr1.TK中TK基因的上游,获得pcDNA3.Pmdr1.CD.TK,酶切及测序鉴定;在脂质体介导下将pcDNA3.Pmdr1.CD.TK转染C6和C6/ADR细胞,500ug/mlG418筛选获得稳定转染细胞株,PCR鉴定自杀基因在两种细胞中的整合情况,RT-PCR鉴定表达情况.结果：C6/ADR细胞生长良好,PCR成功扩增出260bp的Pmdr1并克隆入T载体后,经分子克隆技术将Pmdr1成功插入pcDNA3.TK中,通过酶切和测序证实插入长度和序列正确,形成pcDNA3.Pmdr1.TK;BamHI酶切pcDNA3.CD.TK后获得CD基因,通过基因重组技术成功将其插入同样酶切后的pcDNA3.Pmdr1.TK质粒TK基因的上游,PCR及测序证实插入CD基因的大小、位置及方向正确,形成pcDNA3.Pmdr1.CD.TK;脂质体法将质粒成功稳定转染入C6和C6/ADR细胞,PCR证实自杀基因在两种细胞中都有整合,RT-PCR显示自杀基因仅在耐药细胞株C6/ADR中得到了表达.结论：成功建立了Pmdr1调控的双自杀基因表达系统,并证实其在耐药胶质瘤细胞可特异性表达.
多药耐药基因 启动子 自杀基因 特异性表达 胶质瘤
王成伟 王志刚 孙金龙 曲春城 潘顺 李卫国 宋千 张庆林
山东大学第二医院神经外科
国内会议
青岛
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502-506
2006-07-07（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）