HBV RNA上La protein结合位点的缺失对自身稳定性的影响
目的:研究乙型肝炎病毒(HBV)DNA上的突变所造成HBVRNA上Laprotein结合位点的缺失对HBVRNA在宿主细胞内稳定性的影响,评价HBVDNA上这个位点对HBV生命周期的重要性,从而寻找新的抗HBV靶点.方法:应用PCR,分子克隆和定点突变技术,针对Laprotein与HBVRNA结合的相关位点,构建缺失了Laprotein结合相关位点的HBV突变载体,命名为pHBV-mLa;通过计算机预测突变后,这段序列所在的HBVRNA片段的二级结构;应用脂质体将未突变的HBV载体和HBV突变载体分别瞬时转染入HepG2细胞株中;半定量RTPCR检测HBsAgmRNA和HBeAgmRNA,ELISA检测HBsAg和HBeAg表达情况.结果:酶切鉴定和碱基测序证明,成功构建了Laprotein结合相关位点部分碱基缺失的HBV突变载体--pHBV-mLa;突变后的HBVRNA二级结构同突变前的比较,完全改变;转染后半定量RT-PCR检测,发现突变后HBVHBsAgmRNA和HBeAgmRNA水平均明显降低,ELISA检测发现突变引起HBsAg和HBeAg表达下调.结论:由于HBVDNA上的人工突变,所引起的HBVRNA上Laprotein结合位点相应的改变,使得HBVRNA特殊的二级结构改变,导致Laprotein与HBVRNA结合松弛、解离,无法保护HBVRNA(HBsAgmRNA和HBeAgmRNA),RNA酶就可以引起HBVRNA的降解,从而使HBVRNA水平降低,影响HBV各种蛋白的表达.本实验表明,在HBVDNA上,这个位点碱基序列的保守性使HBVRNA可以形成特殊的二级结构,这个结构影响着HBVRNA在宿主细胞内的稳定性,所以HBVDNA上这个位点的存在和保守对HBV生命周期至关重要.
肝炎病毒 突变 HBV RNA
林园园 林菊生 王晓燕 谢娜 周秀敏 宋宇虎
武汉,华中科技大学同济医学院附属同济医院肝病研究所,430030
国内会议
大连
中文
122-127
2006-05-11（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）