睾酮假单胞菌3α-羟类固醇脱氢酶基因的质粒载体构建及表达
3α-羟类固醇脱氢酶(3α-HSD,E.C.1.1.1.50)是睾酮假单胞菌分泌的多种类固醇脱氢酶的一种,可作用于多种类固醇基质,可逆地催化C<,19-27>类固醇3位羟基/酮基的氧化还原<””1”> .胆汁酸是3α-HSD的作用底物之一,临床上用3α-HSD作为工具酶来测定人血清中的总胆汁酸(TBA)浓度.目前,TBA测定中所用的工具酶3α-HSD均从睾酮假单胞菌直接提取而来.天然3α-HSD提取工艺复杂,为了和其它蛋白相分离,需经过多步层析和制备性等电聚焦电泳技术来纯化<””2”>,步骤繁琐,纯化过程中伴有酶活性的丢失,酶蛋白的得率低,并且3α-HSD与β-HSD也难以分离,这使得直接从细菌中分离的天然3α-HSD价格昂贵,在一定程度上限制了TBA测定的临床推广.因此,本研究以pET15b质粒为载体建立了3α-HSD的原核表达系统,并成功地表达了融合蛋白.利用pET15b质粒编码重组蛋白N端的His标签经Ni-Sepharose柱进行亲和层析,所得样品中3α-HSD的纯度较高,在SDS-PAGE上呈现单一的条带,回收率达68％.这为血清TBA酶循环法测定的建立奠定了基础.
睾酮假单胞菌 3α-羟类固醇脱氢酶 质粒载体构建 原核表达系统 血清TBA酶循环法
张国华 徐国宾 朱立华
北京大学第一医院检验科
国内会议
第二届世界华人临床生化和检验医学大会暨第六届全国检验医学学术会议
南京
中文
327-328
2004-06-01（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）