新型血管形成抑制因子Tumstatin<,45-132>的克隆和表达
目的:克隆人Tumstatin全长编码区及编码Tumstatin<,45-132>的序列,在大肠杆菌重组表达并用内皮细胞增殖试验进行活性检测.方法:采用RT-PCR从人胚肾细胞系293细胞中克隆人的Tumstatin全长编码基因,继以PCR扩增出Tumstatin<,45-132>编码的基因(45-132位氨基酸),PCR产物克隆到pBV22载体中测序证后,转化BL21,42℃进行热诱导表达,SDS-PAGE分析表达产物,对重组蛋白纯化后测定生物活性.结果:RT-PCR扩增出Tumstatin全长编码序列以及PCR扩增出Tumstatin<,45-132>编码序列,经序列分析证实与GenBank中序列完全一致.含有Tumstatin<,45-132>编码基因的表达载体转化BL21后可表在出相对分子量(Mr)为9.6kD的重组蛋白,表达产物的蛋白量占菌体蛋白量的10﹪,该重组蛋白纯化后能够抑制内皮细胞增殖.结论:成功克隆全长Tumstatin cDNA,并在大肠杆菌中表达重组Tumstatin<,45-132>蛋白,并证实具有抑制内皮细胞增殖.
生物活性 血管形成抑制因子 表达载体 内皮细胞增殖
罗以勤 王梁华 球谊 焦炳华
第二军医大学基础医学部生物化学与分子生物教研室(上海)
国内会议
长沙
中文
160-165
2004-09-01（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）