鹅卵泡抑制素α亚基编码区cDNA克隆及表达载体构建
根据genebank中鸡卵泡抑制素α亚基序列设计引物<””1”>,同时,对该序列按大肠杆菌嗜好密码子进行优化<””2”>,在设计的引物两端分别加上限制性内切酶Sac I和Xhol I的识别位点序列.利用RT-PCR技术从溆浦鹅卵泡的颗粒细胞总RNA中扩增出了抑制素α亚基成熟区序列,经PCR扩增出354片段,该片段与pMD18-T栽体连接,转化JM109感受态细胞,从阳性细菌中提取质粒,经Sac I和Xhol I酶切,回收354bp目的片段,定向克隆到pET28a中,转化DH5α受体菌,提取质粒,再转化到BL21(DE3)中,成功筛选出阳性克隆.阳性菌经过双酶切、PCR鉴定和测序,得到的序列与设计的序列完全一致,表明成功构建了抑素素α亚基编码序列的原核表达载体.
鹅 卵泡抑制素 α亚基 编码序列 原核表达载体 基因克隆
吕文发 王恒
吉林农业大学动物科技学院
国内会议
宁波
中文
230-233
2004-08-01（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）