禽流感病毒分离株H5N1非结构蛋白的表达及ELISA检测方法的初步建立
以H5N1亚型禽流感毒株基因组RNA为模板,利用RT-PCR技术,扩增禽流感病毒分离株(H5N1)的NS1基因,得到的基因片段与T载体连接,重组质粒经BamH Ⅰ和Hind Ⅲ双酶切后与载体pET32a连接,转化宿主BL21,IPTG诱导表达目的蛋白.SDS-PAGE及western Blot检测和鉴定结果表明,在大肠杆菌中成功表达了NS1蛋白,分子量约45kDa,且该表达产物可与AIV感染的动物血清产生免疫反应.以纯化的融合蛋白作为包被抗原对免疫和人工感染的血清进行ELISA检测.结果显示,该方法检测到AIV感染鸡所产生的抗体,而不能检测到AIV灭活疫苗免疫后的SPF鸡血清中的抗体,由此表明以NS1重组表达产物作为抗原建立的ELISA,可用作AIV疫苗接种与野毒感染的鉴别诊断.
禽流感病毒 非结构蛋白 克隆 表达 ELISA检测 鉴别诊断 血清学
霍惠玲 李永清 周雪媚
河北省兽药监察所(石家庄) 北京市农林科学院畜牧兽医研究所(北京海淀) 中国农业大学动物医学院(北京)
国内会议
贵阳
中文
315-317
2004-09-01（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）