旋毛虫新生幼虫p46 kDa抗原基因的原核表达及初步分析

摘要：

目的:将编码旋毛虫新生幼虫p46 kDa抗原基因cDNA进行原核表达并对其表达产物进行抗原性分析.方法:以旋毛虫新生幼虫cDNA表达文库免疫筛选阳性克pBK-CMV-WN10 cDNA为模板设计引物,利用PCR技术去除信号肽序列后克隆到原核表达载体pET-28a,构建重组表达载体.重组质粒pET28a-WN10经酶切及测序鉴定后转化表达菌BL21 star(DE3),用异丙基硫代β-D-半乳糖苷(IPTG)诱导表达菌,应用切胶和电流脱法纯化表达产物后,进行Western blotting和ELISA分析重组抗原的抗原性.结果:SDS-PAGE分析结果显示,经IPTG诱导后重组转化菌裂解产物与对照菌相比出现了1条分子量约为48kDa的新条带,大小与外源cDNA融合蛋白的理论值相符;Western blotting和ELISA结果显示,融合蛋白可被旋毛虫感染猪血清和兔抗融合蛋白血清识别;兔抗融合蛋白血清可识别旋毛虫新生幼虫抗原的46kDa蛋白带.结论:成功构建了编码旋毛虫新生幼虫p46 kDa抗原的重组表达载体,获得融合蛋白,具有良好的抗原性.

关键词： 旋毛虫 新生幼虫 p46 kDa抗原基因 抗原性 原核表达

作者: 原丽红 付宝权 刘明远 张亚兰 吴秀萍 李莲瑞 卢强 陈启军 P.Boireau

会议类型: 国内会议

会议名称: 中国畜牧兽医学会家畜寄生虫学分会第5次代表大会暨第8次学术研讨会

会议地点: 桂林

会议语种:中文

页码: 272-276

在线出版日期: 2004-11-01（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）