用鸡体偏嗜性密码子对H5亚型禽流感病毒HA基因的优化与构建及其DNA疫苗体外表达研究
不同物种间细胞在蛋白翻译过程中具有密码子使用的偏嗜性,鸡与A型流感病毒保护性免疫原HA蛋白氨基酸密码子使用频率存在着明显差异.为此,利用寡核苷酸合成、重叠延伸PCR及限制酶切法构建了密码子优化的A/Goose/GuangDong/1/96(H5N1)”GD/1/96(H5N1)”的HA基因(optiHA),并将其插入CMV启动子表达载体pCI构建了H5亚型DNA疫苗质粒pCIoptiHA,将含有GD/1/96(H5N1)野生型HA基因的质粒pCIHA和pCIoptiHA分别转染293T细胞,间接免疫荧光检测转染后24-48小时293T细胞中瞬时表达的HA抗原蛋白;Western-blot证实上述2种表达质粒均可正确表达H5亚型HA抗原蛋白,结果表明密码子优化的基因optiHA体外瞬时表达水平显著高于野生型HA基因.这一结果为进一步开展SPF鸡免疫保护效果的比较研究奠定了基础.
HA基因 密码子优化 重叠延伸PCR 间接免疫荧光 Western blot检测 禽流感病毒 DNA疫苗 体外表达
姜永萍 李呈军 张洪波 步志高 张芳芳 于康震 陈化兰
中国农业科学院哈尔滨兽医研究所农业部动物流感重点开放实验室/兽医生物技术国家重点实验室 中国农业科学院哈尔滨兽医研究所兽医生物技术国家重点实验室(黑龙江哈尔滨) 农业部畜牧兽医总站(北京)
国内会议
中国畜牧兽医学会2004年学术年会暨第五届全国畜牧兽医青年科技工作者学术研讨会
北京
中文
759-763
2004-09-01（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）