犬新孢子虫NcSRS2基因的亚克隆与融合蛋白的表达

摘要：

本研究根据NcSRS2基因序列设计合成一对引物,将上、下游引物分别引入EcoRI,XhoI酶切位点,用PCR技术从pGEX-4T-NcSRS2重组质粒扩增编码NcSRS2的基因片段,插入到pGEX-6p-1质粒的多克隆位点,转化大肠杆菌BL21感受态细胞,于氨苄青霉素阳性LB培养平板上筛选阳性克隆,酶切及PCR鉴定;经IPTG诱导在E.coli中表达,用SDS-PAGE分析表达产物并纯化.结果表明,NcSRS2基因体外扩增产物与预期值相符,约1047bp;所构建pGEX-6p-NcSRS2重组质粒阳性克隆经双酶切与PCR鉴定,与预期结果一致;SDS-PAGE显示,表达融合蛋白产物约为62.6kD,表达效率为32.3﹪;表达的融合蛋白易于纯化.

关键词： 犬新孢子虫 NcSRS2基因 融合蛋白 原核表达 基因克隆

作者: 余劲术 刘群 汪明

作者单位: 中国农业大学动物医学院(北京)

会议类型: 国内会议

会议名称: 中国畜牧兽医学会2004年学术年会暨第五届全国畜牧兽医青年科技工作者学术研讨会

会议地点: 北京

会议语种:中文

页码: 1080-1083

在线出版日期: 2004-09-01（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）