鸡体偏嗜性密码子优化免疫原基因增强H5亚型禽流感DNA疫苗免疫保护效果
利用寡核苷酸合成、重叠延伸PCR法及限制酶切法构建了密码子优化的A/Goose/GuangDong/1/96(H5N1)”GD/1/96(H5N1)”的HA基因(optiHA),并将其插入CMV启动子表达载体pCI构建了H5亚型DNA疫苗质粒pCIoptiHA.将pCIoptiHA和表达GD/1/96(H5N1)HA基因的DNA疫苗质粒pCIHA通过间接免疫荧光法和Western-blot分析检测转染293T细胞后瞬时表达的HA抗原蛋白;随之将pCIoptiHA及pCIHA分别以100μg和10μg剂量一次免疫3周龄SPF鸡,4周后用100LD<,50>的HPAIV GD/1/96(H5N1)鼻腔途径进行攻击.结果,间接免疫荧光法和Western-blot分析表明密码子优化的HA基因表达水平显著高于野生型HA基因;免疫SPF鸡后,100μg pCIoptiHA可形成75﹪的免疫保护,100μg pCIHA可形成50﹪的免疫保护;10μg pCIoptiHA可形成对免疫鸡75﹪的部分免疫保护,而10μg pCIHA则基本不能形成免疫保护;pCIoptiHA诱导的HI抗体水平远远高于pCIHA.试验结果表明,HA基因密码子的优化可显著提高HA基因体外表达水平和H5亚型禽流感DNA疫苗诱导的保护性抗体免疫反应水平,增强免疫保护效果.
禽流感 H5亚型 DNA疫苗 免疫保护 密码子优化
姜永萍 张洪波 李呈军 步志高 张芳芳 于康震 陈化兰
中国农业科学院哈尔滨兽医研究所农业部动物流感重点开放实验室/兽医生物技术国家重点实验室 中国农业科学院哈尔滨兽医研究所兽医生物技术国家重点实验室(黑龙江哈尔滨) 农业部畜牧兽医总站(北京)
国内会议
中国畜牧兽医学会2004年学术年会暨第五届全国畜牧兽医青年科技工作者学术研讨会
北京
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763-767
2004-09-01（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）