猪传染性胸膜肺炎放线杆菌毒素apxⅡ基因无药物抗性标记突变株HBC<”->/GFP<”+>的构建及其生物学特性研究
通过使用枯草芽胞杆菌蔗糖敏感基因sacB发展了一种依靠蔗糖的负向筛选系统,这种方法允许没有标记突变的基因进入胸膜肺炎放线杆菌染色体.首先,构建了猪传染性胸膜肺炎放线杆菌毒素apxⅡ基因GFP插入失活型的重组质粒pOSAKCG,其中一个表达盒含有氨苄青霉素基因和以外膜蛋白omlA作为启动子表达sacB基因.电穿孔转化重组质粒pOSAKCG,它的突变apxⅡCG基因与亲本菌株胸膜肺炎放线杆菌HB染色体上野生型apxⅡCA基因发生同源交换,两步法筛选获得了突变株HBC<”->/GFP<”+>,PCR和southern blot对突变株进行初步鉴定,进一步对突变株的生物学特性,包括溶血活性、免役原性、生长特性及其对小鼠的安全性进行了研究.结果表明,无药物抗性标记突变株的构建是成功的,该突变株的成功构建为进一步研究突变株作为疫苗和载体奠定了基础.
胸膜肺炎放线杆菌 毒素apxⅡ基因 突变株 猪传染性胸膜肺炎 兽医病原微生物学
贝为成 何启盖 陈焕春 方六荣 肖少波 洪文洲 刘丽娜
华中农业大学动物医学院动物病毒室(湖北武汉)
国内会议
中国畜牧兽医学会2004年学术年会暨第五届全国畜牧兽医青年科技工作者学术研讨会
北京
中文
14-17
2004-09-01（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）