检测鸭瘟病毒PCR方法的建立及其在临床诊断和免疫与致病机理研究中的初步应用
根据Genbank文献,用计算机分析并合成了1对用于扩增鸭瘟病毒(Duck Plague Virus,DPV)ECOR I基因765bp片段的引物,上游引物(P1)位于ECOR I基因的246-266位,下游引物(P2)位于ECOR I基因的727-744位,以DPV CHa株DNA为模板,筛选最佳反应条件和试剂工作浓度,建立了检测DPV的PCR方法.应用该方法对DPV强毒株鸭胚培养物和弱毒株鸡胚培养物进行基因扩增,均可获得498bp的特异性DNA片段,而对正常鸭(鸡)胚和鸡马立克氏病毒、鸡传染性喉气管炎病毒、鸭病毒性肝炎病毒、多杀性巴氏杆菌、大肠杆菌、鸭副伤寒沙门氏菌和鸭疫里默氏杆菌进行检测,结果均呈阴性,没有出现交叉反应,对扩增产物进行测序的结果与文献报道的一致,证明PCR扩增产物与方法的特异性.对DPV CHa株鸡胚毒提取物DNA进行检测,其最低检出量为10fg.用病毒分离、Dot-ELISA和PCR三种方法检测1990-2002期间送检的临床样品,对所获得的结果进行X<”2>分析,证明PCR检出率明显高于前2种方法.CHa株免疫雏鸭后对血液、心、肝、脾、肺、肾、十二指肠、直肠、法氏囊、胸腺、胰腺、延脑、大脑、小脑、舌头、肌肉、骨髓、粪便和食道共19种组织PCR检测结果表明①皮下接种后4h心、肝、脾、肾、法氏囊、胸腺、胰腺、延脑、大脑和小脑阳性,8h全部19种组织阳性;②口服接种后4h舌头和食道阳性,8h心、肝、脾、肾、胸腺、胰腺、延脑、大脑、小脑、舌头、食道和血液阳性;③滴鼻接种后4h无阳性组织,8h后可在心、肝、脾、肾、胸腺、延脑、大脑、小脑、舌头、食道和血液阳性;④三种免疫途径的鸭从12h至第21天均能所有采组织中检测出DPV DNA.DPV强毒SC1株人工感染成年鸭2小时后即能够从脑、肝、脾、法氏囊、胸腺中检出DPV DNA.12小时后及其死亡鸭均可从心脏、肝脏、脾脏、肺脏、肾脏、十二指肠、直肠、法氏囊、胸腺、胰腺、脑、胸肌、食道、腺胃、血液、舌头、口腔分泌物、皮肤、骨髓和粪便等20种组织器官中检测到DPV的DNA.研究表明建立的PCR可用于鸭瘟的快速诊断和分子流行病学调查,实验结果对阐明鸭瘟弱毒的免疫机理和强毒的致病机理提供了重要的实验数据.
PCR 检测 鸭瘟弱毒及强毒株 免疫及致病机理
程安春 汪铭书 刘菲 宋涌 袁桂萍 韩晓英 徐超 廖永洪
四川农业大学动物科技学院禽病研究中心(四川雅安)
国内会议
江苏无锡
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233-241
2004-04-01（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）