白细胞介素15基因克隆、改型及其在NCI-H446细胞中的表达

摘要：

目的 用IL-2信号肽基因片段(FIL-2sp)与IL-15成熟肽基因片段(FIL-15mp)拼接,构建改型IL-15基因片段FIL-2sp-IL-15mp,插入真核表达载体pEGFP-N1,构建成改型IL-15真核表达载体pIL2sp-IL-15mp,转染人小细胞肺癌NCI-H446细胞,观察其对IL-15表达和分泌的影响.方法:分别以pcDNA3-IL-2和pCI-IL-15为模板,PCR扩增得到FIL-2sp和FIL-15mp.利用基因拼接的方法,构建改型IL-15基因(FIL-2sp-IL-15mp).双酶切将其插入真核表达载体pEGFP-N1,构建重组表达载体pIL2sp-IL-15mp.同时构建不改变IL-15信号肽的重组真核表达载体p15和无信号肽的p15mp真核表达载体作为对照.在Lipofectmine2000介导下将PIL2sp-IL-15mp转染小细胞肺癌(NCI-H446)细胞,G418筛选,直至出现阳性克隆,挑取抗性克隆,扩大培养,RT-PCR方法检测IL-15mRNA的表达;收集细胞培养上清,ELISA法检测IL-15蛋白的分泌.结果:成功构建FIL-2sp-IL-15mp及pIL2sp-IL-15mp,将三种重组表达载体转染NCI-H446,得到稳定转染的细胞株.RT-PCR检测转染组均有IL-15mRNA的表达,冻干法50倍浓缩细胞上清,ELISA方法检测pIL2sp-IL-15mp转染组IL-15蛋白表达量为22pg/ml,其他转染组未见IL-15蛋白分泌.

关键词： 白细胞介素 信号肽 基因克隆 基因拼接 基因转染 肿瘤基因治疗

作者: 张征峥 王润田 王丽 佟慧 李全海 杨丽娟 王平

作者单位: 河北医科大学基础所免疫室(石家庄)

会议类型: 国内会议

会议名称: 肿瘤免疫生物治疗国际研讨会暨河北省免疫学会第四届第一次学术年会

会议地点: 石家庄

会议语种:中文

页码: 120-126

在线出版日期: 2004-04-01（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）