动脉粥样硬化关键性酶——脂蛋白相关磷脂酶A2的基因克隆、表达、纯化和活性测定
脂蛋白相关磷脂酶A2(Lp-PLA2)能够水解氧化修饰的磷脂产生溶血磷脂酰胆碱和氧化的不饱和脂肪酸,后两者在动脉粥样硬化过程中扮演着重要的角色.我们从分化的THP-1细胞中首次成功克隆出了Lp-PLA2全长基因.作为一个药物发现靶点,我们将该基因亚克隆到杆状病毒转移载体,同时引入了一个C末端His Tag序列,该酶然后在昆虫细胞系Sf9和High Five细胞中表面并采用镍亲和层析纯化.运用”<”3>H”PAF或DNGP作为底物检测Lp-PLA2的酶活性,显示表达的Lp-PLA2具有很好的酶活性,抑制剂SB435495对表达重组Lp-PLA2的抑制曲线与对人血浆中纯化的Lp-PLA2抑制曲线一致.
脂蛋白相关磷脂酶 昆虫细胞 蛋白纯化 基因克隆 活性测定 动脉粥样硬化 基因表达 药物靶标 酶抑制剂
张福军 董立 王逸平
中国科学院上海生命科学研究院上海药物研究所;上海浦东张江高科技园区祖冲之路555号(上海)
国内会议
杭州
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433-437
2004-12-01（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）