高密度发酵制备重组人OCIF活性域多肽融合蛋白
目的:利用原核重组表达系统,完成人破骨细胞形成抑制因子活性域(Osteoclastogenesis Inhilitory Factor Active Domain,OCIP—AD)可溶性融合表达中试.方法:OCIF—AD编码区基因插入大肠杆菌表达质粒pMAL—c2中编码麦芽糖结合蛋白(Maltose-binding Protein,MBP)的MalE基因下游,构建重组融合表达载体pMAL—OCIFAD及用于表达融合蛋白的工程菌株;在3.7升发酵罐上进行补料—分批发酵,发酵过程中,溶解氧控制在30—50﹪,接种量为5﹪,表达分为两个阶段,37℃培养2—4h,进行菌体生长,然后,加入IPTG诱导表达6h.发酵结束,对菌体上清液进行直链淀粉树脂亲和层析.结果:发酵液的最终菌体密度OD<,600>达到12.5(相当于每升发酵液含有35g湿菌体),OCIFAD融合蛋白占菌体总蛋白的45﹪左右,含量超过0.9g/L.其中,所表达的OCIFAD融合蛋白40﹪在上清而直接显示有生物活性,60﹪以包涵体形式存在.上清用亲和层析法一步纯化,纯度达到70﹪以上,包涵体超声破菌后经两次洗涤,纯度达到80﹪以上.结论:OCIFAD在大肠杆菌中实现了融合高表达.
破骨细胞形成抑制因子 融合表达 发酵 多肽融合蛋白
张兴群 王梁华 焦炳华 袁勤生
华东理工大学生物反应器工程国家重点实验室(上海) 第二军医大学基础部生物化学和分子生物学教研室(上海)
国内会议
北海
中文
175-178
2004-09-01（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）