GFP基因体外转染家鸡囊胚层细胞的初步研究
将黑凤鸡新产蛋囊胚分离,物理消化,用生长培养基(M199,10％,FBS,2﹪,鸡血清,50μg/ml丙酮酸钠,50μg/ml庆大霉素)进行体外加盖片培养.每个培养皿(4个胚)为一个转染单位,用绿色荧光蛋白质粒pEGFP-C1通过脂质体LIPOFECTAMINE<”TM>以贴壁细胞方式转染加盖片培养4h的BCs.最佳转染条件为:1.5μg质粒DNA,5μl(1mg/ml)脂质体,脂质体-DNA复合物形成时间为30min,转染时间为6h,加入1ml M199(20﹪FBS,4﹪鸡血清)后培养12h.用荧光显微镜(BH2-RFL),在B(Blue)激发区,激发滤片BP-490,增补激发滤片(EY-455或EY-475),双向分色镜为B(DM-500+0-515)的条件下,观察绿色荧光(激发波长455~490nm,荧光波长小于507nm),约有30﹪ BCs发绿色荧光.该方法同样适用于转染长沙黄鸡和”华星白”蛋鸡.
家鸡 囊胚细胞 绿色荧光蛋白 GFP基因 体外转染
燕海峰 Pavel Trefil 肖兵南 刘士寻 吴晓林
湖南省畜牧兽医研究所(长沙) 捷克生物医药研究所(布拉格)
国内会议
广州
中文
469-473
2003-11-01（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）