原核、真核双表达加强型绿色荧光蛋白质粒的构建与鉴定

摘要：

将原核启动子Ptrc和加强型绿色荧光蛋白(EGFP)基因从EGFP原核表达质粒pYA3334-EGFP上切下,然后将其插入至真核表达质粒pVX1真核启动子PCMV的下游构建成具有真核和原核启动子的双表达杂合质粒pVAXD-EGFP.新构建的质粒全长3823bp,pVAXD-EGFP分别转化鼠伤寒沙门氏菌X4550和转染COS-7细胞,应用流式细胞术、可见光谱扫描、SDS-PAGE测定EGFP原核表达;应用荧光显微镜观察EGFP在COS-7细胞内的表达.重组鼠伤寒沙门氏菌X4550(pYA3334-EGFP)相当;将质粒pVAXD-EGFP转染COS-7细胞,EGFP可在COS-7细胞核和胞浆表达,在荧光显微镜下发出强烈荧光.本文成功构建原核、真核表达集中于同一质粒的新型质粒pVAXD-EGFP,并且原核、真核的蛋白表达量达到很高水平,这不但拓宽了对表达质粒的认识,而且还显示其在新型重组细菌疫苗方面有着诱人的应用前景.

关键词： 加强型绿色荧光蛋白(EGFP) 双表达质粒 鼠伤寒沙门氏菌 沙门氏菌 真核启动子

作者: 张晓明 焦新安 潘志明 张小荣 马丽 顾健 郭荣 刘秀梵

作者单位: 扬州大学生物科学与技术学院;扬州大学农业部畜禽传染病学重点开放实验室(江苏扬州) 扬州大学生物科学与技术学院(江苏扬州) 扬州大学农业部畜禽传染病学重点开放实验室(江苏扬州) 扬州大学临床医学院(江苏扬州) 扬州大学化学化工学院(江苏扬州)

会议类型: 国内会议

会议名称: 中国微生物学会兽医微生物专委会学术年会中国畜牧兽医学会生物制品学分会第九次学术研讨会

会议地点: 青岛

会议语种:中文

页码: 199-202

在线出版日期: 2003-10-01（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）