破伤风毒素C片段的基因克隆、表达、纯化及免疫原性分析
应用PCR技术直接从破伤风梭状芽孢杆菌的质粒DNA中扩增出1.4Kd的破伤风毒素C片段(简称TTC)基因,经序列分析与国内克隆株的序列相同.将此基因片段插入到表达载体pET-22b(+)中,并在大肠菌BL21(DE3)中表达.经SDS-PAGE分析,表达产物的分子量约为55Kd,表达量占菌体总蛋白的15％.免疫印迹实验证实该重组蛋白是破伤风毒素C片段抗原.经两步纯化——阴离子交换层析和金属离子螯合亲和层析,得到纯度为96.5％的重组蛋白.参照《中国生物制品规程2000年版》的免疫攻击实验方法对纯化的重组蛋白进行检测,其效价为18.706IU/mg,ED<,50>为20μg.经加强免疫,1μg免疫剂量即能产生足够的抗体保护动物免受破伤风毒素的攻击,说明重组蛋白具有良好的免疫原性.
破伤风毒素 基因克隆 重组表达 蛋白纯化 免疫原性 分离纯化
谭亚军 雷殿良 张庶民
中国药品生物制品检定所血清室
国内会议
北京
中文
213-216
2003-10-01（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）