hCu,Zn-SOD-TAT PTD的融合表达及其跨膜转运性质的初步研究
HIV-I反式激活蛋白TAT中的一段富含碱性氨基酸的短序具有独特的膜转运能力,被称为TAT蛋白转导结构域(protein transduction domain,PTD).从人肺cDNA文库中PCR扩增hCu,Zn-SOD基因,插入pUC19测序;以测序质粒为模板,再用含TAT PTD编码序列的3”引入PCR扩增得hCu,Zn-SOD-TAT PTD融合基因,并插入pUC19.将SOD基因和SOD-TAT PTD融合基因分别亚克隆至温控表达载体pJW2,转化大肠杆菌DH5α.SDS-PAGE和Western blot结果表明,热击诱导4小时后,分别在19KD和22KD处出现SOD和SOD-TAT PTD目标表达条带,表达蛋白以包涵体形式存在.分别提取SOD和SOD-TAT PTD包涵体,复性纯化后SOD和SOD-PTD重组蛋白均具有特异的SOD酶活性,其比活性分别为12×10<”3>NU/mg和9.9×10<”3>NU/mg.细胞试验结果表明,与SOD相比较,SOD-PTD融合蛋白可以有效地跨膜转运至细胞内.
SOD-TAT PTD融合蛋白 基因克隆 蛋白转导 超氧化物歧化酶 复性纯化
汪飞鹏 桂向东 宋礼华
安徽安科生物工程股份有限公司(合肥);安徽医科大学生物化学教研室(合肥)
国内会议
北京
中文
168-171
2003-10-01（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）