重组活性羧肽酶B在胰岛素原C肽制备工艺中的应用

摘要：

用RT-PCR方法克隆了大鼠羧肽酶原B的cDNA编码序列,将其重组到原核表达质粒pT7-473中,并在大肠杆菌中可以包涵体方式获得高表达,SDS-PAGE电泳及灰度扫描显示表达量达菌体总蛋白的35﹪,表达产物融合了表达质粒上的6His,在变性条件下,经Ni-NTA柱纯化,得到胰蛋白原B,在复性液中复性后,胰蛋白酶切得具酶活性的羧肽酶B.然后经DEAE-FF分离纯化获得较纯的羧肽酶B 110mg/L发酵液,比活为13.5u/mg.该重组的羧肽酶B可应用于胰岛素原C肽的制备工艺中.

关键词： 羧肽酶原B 羧肽酶B 融合表达 分离纯化 胰岛素原C肽 制备工艺 基因工程

作者: 李素霞 张育坚 田丽萍 刘海峰 张晓彦 夏文超 龚毅 袁勤生

作者单位: 华东理工大学生物反应器国家重点实验室(上海);中国科学院上海生命科学研究院生物工程中心(上海) 中国科学院上海生命科学研究院生物工程中心(上海) 华东理工大学生物反应器国家重点实验室(上海)

会议类型: 国内会议

会议名称: 2003年全国生化与生物技术药物学术研讨会

会议地点: 丹东

会议语种:中文

页码: 288-293

在线出版日期: 2003-08-01（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）