APP17肽对Aβ导致神经元毒性作用的影响
目的:老年性痴呆(Alsheimer”s Disease,AD)是中枢神经系统退行性疾病,以老年斑和神经纤维缠结为主要病理特征,而老年斑以β-淀粉样肽(β-Amyloid,aβ)沉积为核心,目前认为Aβ神经元毒性定位于Aβ<,25-35>.Ab前体蛋白(b-amyloid protein precursor,APP)是一种具有受体样结构的跨膜糖蛋白,其中APP<,319-335>肽段即APP17肽(APP17-mer peptide),据国外文献报道及本室近近来研究表明,此肽具有促进神经元生长、增强动物学习、记忆功能和改善神经退行性变的作用.本研究目的在于通过观察APP17肽对Aβ<,25-35>引起人神经母细胞瘤株SY5Y毒性作用的影响,进一步证实此肽的神经营养作用,并为阐明老年性痴呆的发病机制和临床治疗提供理论依据.方法:固相法合成APP17肽、Aβ<,25-35>,高效液相纯化,以人神经母细胞瘤株SY5Y为细胞模型,分为正常对照组、Aβ<,25-35>10μmol/L损伤组和Aβ<,25-35>10μmol/L加APP17肽10μmol/L保护组.以细胞计数、噻唑蓝(thiazoll bull,MTT)代谢率、LDH漏出率、细胞轴突长度、胞体面积、NT-3免疫细胞化学染色和细胞内游离钙子(Ca<”2+>浓度为观察指标.结果:从接种第6d始,Ab<,25-35>组细胞数明显低于对照组,而APP17肽加Ab<,25-35>组细胞数高于Ab<,25-35>组,两组相比P<0.01.Ab<,25-35>组LDH漏出率高于对照组,而Ab<,25-35>加APP17加Ab<,25-35>组明显低于Ab<,25-35>组,两组相比P<0.01.Ab<,25-35>组轴突长度和胞体面积明显小于对照组,而APP17肽加Ab<,25-35>明显大于Ab<,25-35>组.NT-3免疫细胞化学染色结果显示:对照染色强度为0.6104±0.05,9Ab<,25-35>组为0.5372±0.089,两者相比P<0.05,说明Ab<,25-35>组染色浅,NT-3表达量少.而APP17EDY LK Ab<,25-35>组染色强度与对照组相似,为0.6226±0.047,明显高于Ab<,25-35>组,两者相比P<0.01.细胞内游离(Ca<”2> 浓度测定结果 负载荧光探针的细胞培养液中加入Aβ<,25-35>25μmol·L<”-1>后可见细胞内Ca<”2>荧光强度相对值明显上升,且一直持续6~9min;而预先加入APP17肽20 μmol·L<”-1>,后再加入Aβ<,25-35>25μmol·L<”-1>,则未见此变化.但加入Aβ<,25-35>25μmol·L<”-1>后再加入APP17肽 20 μmol·L<”-1>,不能使此变化消失.结论:APP17肽具有营养和保护神经元作用,可减轻Ab引起的神经元损伤,此作用可能是通过上调神经营养因子的表达和调节Ca<”2+>稳态平衡完成的.
APP17肽 Aβ<,25-35> 神经营养作用 老年性痴呆 β-淀粉样肽 神经元毒性
王蓉 张景艳 姬志娟 徐艳玲 盛树力
首都医科大学宣武医院;北京脑老化研究实验室(北京)
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2001-10-01（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）