酵母双杂交系统筛选与GIF相互作用的G-蛋白Rab3a及dUTPase的研究
生长抑制因子(growth ynhibitory factor,GIF),又称金属硫蛋(metallothionein-3,MT-3)特异地分布于脑组织,在与Alzheimer”s病脑提取物共存的情况下,对神经细胞的生长具有明显的抑制作用.提示GIF可能是Alzheimer”s病相关的因子.为了探索GIF在神经生理活动中的作用和阐明与Alzheimer”s病因的关系,以GIF为诱饵基因,构建诱饵质粒pHyblex-GIF(baitl),应用酵母双杂交系统,对人脑cDNA交库进行了4.6*106个酵母转化子的筛选;得到12个较强的双阳性(His+lacZ)酵母克隆.对阳性酵母中的文库质粒进行DNA序列分析和网上DNA序列同源检索,结果表明其中4个阳性文库质粒的插入片段分别编码:线粒体细胞色素c氧化酶亚基II、线粒体ATP合成酶α亚基、细胞核dUTPase和G-蛋白Rab3a的部分蛋白序列.经聚合酶链式反应(PCR)得到包含蛋白全编码区的Rab3a cDNA和核dUTPase cDNA.双杂交系统实验表明,完整的Rab3a可与GIF相互作用.此外,我们还将Rab3a cDNA克隆于原核融合表达载体pGEX-4T-1,在大肠杆菌BL21中进行了诱导表达和纯化.
生长抑制因子(GIF) 金属硫蛋白(MT) 酵母双杂交系统 Rab3a Alzheimer”s症 阿尔茨海默病
任宏伟 康巧华 陈巧林 茹炳根
北京大学生命科学院,生物化学与分子生物学系,蛋白质工程国家重点实验室(北京)
国内会议
武汉
中文
24-25
2001-10-01（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）