RARE介导的视黄酸可调控的IFNα表达载体的构建及其对肿瘤细胞增殖功能的影响
目的构建一个含视黄酸反应元件(RARE)的IFN表达载体,使其在真核细胞内的表达受视黄酸(RA)的诱导.方法运用DNA重组技术构建含有4个RARE重复序列的IFNα真核表载体(pRARE4-IFNα),经酶切、PCR鉴定和测序确认后,用脂质体转染法使其转染HL-60细胞(人早幼粒白血病细胞系)、Bcap-37和MCF-7细胞(人乳腺癌胞系),RA处理后,RT-PCR分析IFNamRNA水平,ELISA检测培养细胞上清中IFNa含量,MTT实验检测细胞增殖功能,流式细胞仪分析细胞周期相分布情况.结果pRARE4-IFNα转染的HL-60、Bcap-37和MCF-7细胞,IFNα分泌量为16～24ng/ml/10<”6>细胞,而经RA处理24h,IFNα表达水平可增加8～13倍,但经RA处理24h的细胞,换无RA的新鲜培养基继续培养24h后,IFNα表达水平又下降到25～34ng/ml*10<”6>细胞.RT-PCR检测结果显示,未转染的HL-60细胞IFNα mRNA表达水平较低,未转染的Bcap-37和MCF-7细胞未检测出IFNα mRNA,而转染细胞IFNα mRNA水平较高,经PA处理后的转染细胞IFNα mRNA明显增加.MTT实验和流式细胞仪分析结果表明,pRARE4-IFNα转染细胞与未转染细胞生长特性无明显差别,RA对转染细胞的增殖抑制作用强于对未转染细胞的增殖抑制.结论带有RARE的IFNα表达载体转染细胞后,外源性IFNα基因的表达受RA的诱导.PR及其诱导的外源怀IFN基因产物对肿瘤细胞的增殖抑制作用具有协同效应.
视黄酸 干扰素 视黄酯反应元件 表达载体 增殖抑制作用 肿瘤细胞
糜漫天 张乾勇 程天民 韦娜 朱晓霞
第三军医大学预防医学系营养卫生学教研室(重庆)
国内会议
上海
中文
132-137
2001-10-01（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）