猪miRNA-215前体序列突变对miRNA-215表达及大肠杆菌抗性的调控作用分析
(目的)microRNAs 在动物生长发育与疾病发生过程中均发挥着重要的调控作用,其功能序列区的遗传变异能够造成其相关功能的变化.本课题组前期通过高通量测序并结合荧光定量验证筛选出miR-215 是与断奶仔猪E.coli F18 抗性有关的microRNA.本研究旨在探究miRNA-215 前体序列突变对miRNA-215 调控网络以及大肠杆菌抗性的影响.(方法)本研究运用聚合酶链式反应-单链构象多态性(PCR-SSCP)分别对苏太猪和梅山猪miR-192 和-215 前体序列进行遗传变异检测,同时构建miR-215 前体野生型和突变型表达载体,研究miRNA-215 前体序列遗传变异对miRNA-215 表达水平、靶基因(DLG5、ALCAM)表达水平、细胞因子表达水平以及粘附水平的影响.(结果)本文研究发现miR-192前体序列不存在突变,而miR-215 前体序列存在两处突变,分别是6 bp 处的AT 碱基插入突变(从miR-215 前体的第一个碱基开始)和43 bp 处的C/T 突变,两个突变在两个群体中均存在3 种基因型.细胞水平研究结果显示,相对于野生型载体转染组,C/T 突变型载体转染组细胞的miRNA-215 表达水平显著下调、靶基因表达水平显著上升,细胞因子水平升高,且其大肠杆菌粘附水平显著上升；而AT 插入突变型载体转染细胞组未发生显著变化.(结论)miRNA-215 前体序列变异可能对miRNA-215 调控网络产生影响,进而改变小肠上皮细胞稳定性,影响了机体对大肠杆菌的抗性.研究成果可为今后进一步开展miR-215 对仔猪F18 大肠杆菌抗性的调控机制的研究提供指导,同时也为寻找适合中国地方猪种抗F18 大肠杆菌病的有效遗传标记的奠定科学基础.
猪 miR-215 miR-192 前体序列 大肠杆菌
王海飞 孙丽 郜重丞 吴圣龙 包文斌
扬州大学动物科学与技术学院,江苏省动物遗传繁育与分子设计重点实验室,扬州 225009 扬州大学动物科学与技术学院,江苏省动物遗传繁育与分子设计重点实验室,扬州 225009;扬州大学教育部农业与农产品安全国际合作联合实验室,扬州 225009
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2019-04-01（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）