虾肝肠胞虫LAMP检测技术的建立与应用
本文根据虾肝肠胞虫(Enterocytozoon hepatopenaei,EHP)18S的保守序列设计4套环介导等温扩增(LAMP)引物,从中筛选出一套引物对LAMP反应体系(Bst DNA聚合酶浓度、内外引物浓度比、dNTP浓度、Mg2+浓度)和反应条件(温度)进行优化.并对优化后的LAMP反应体系和条件进行特异性、灵敏度及精密度验证.特异性试验表明,该方法能特异性检测虾肝肠胞虫,而与其他病害的核酸没有交叉反应；灵敏度试验表明,可检测浓度为10 fg/μL的质粒DNA,制作的标准曲线可对虾肝肠胞虫进行定量分析.重复性试验结果表明,该方法Ct值的变异系数为2.88％-3.02％,具有良好的稳定性.而对于人工侵染的虾肝肠胞虫样品,LAMP方法可检测低至0.44 pg/μL.应用建立的LAMP方法对3个不同地区的120份凡纳滨对虾样品进行检测,检测结果表明EHP阳性样品数为43,与qPCR检测结果符合率达96％.本研究所建立的LAMP方法具有特异性好、灵敏度高、重复性好的特点,并能在30min内完成样品的检测,是快速、定量检测虾肝肠胞虫的有效手段.
虾肝肠胞虫 环介导等温扩增(LAMP) 18S qPCR
陈进会 刘国庆 陈洵 段丽萍 石磊
东莞出入境检验检疫局 暨南大学食品安全与营养研究院
国内会议
浙江义乌
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1148-1157
2018-10-01（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）