基于microRNA 21的调控作用探讨胃癌间质液对肿瘤的影响及消痰散结方作用机制
目的：提取并鉴定肿瘤间质液,观察在肿瘤间质液的干预下对皮下移植瘤及原位移植瘤生长的影响,消痰散结方干预SGC-7901原位移植瘤,检测microRNA 21(miR-21)的表达,深入探讨消痰散结方从痰论治胃癌的机制.方法：离心过滤法提取SGC-7901胃癌间质液；液基细胞采集与处理病理技术对SGC-7901胃癌间质液鉴定；ELISA法检测肿瘤间质液中IL-8、ICAM-1含量；CCK-8方法检测胃癌间质液对SGC-7901的增殖的影响及消痰散结方中药血清对胃癌间质液影响下胃癌细胞生长增殖的作用；胃癌间质液注射于SGC-7901人胃癌皮下移植瘤旁观察对肿瘤生长的影响；消痰散结方对SGC-7901人胃癌原位移植荷瘤裸鼠肿瘤生长的作用,荧光定量PCR法检测miR-21含量.结果：运用离心过滤方法能得到的SGC-7901人胃癌间质液且经HE染色病理证实不含肿瘤细胞；过滤前与过滤后的IL-8、ICAM-1含量无差异(P＞0.05),均高于正常组(P＜0.05)；过滤前与过滤后miR-21含量亦呈无差异(P＞0.05),均高于正常组(P＜0.05).不同浓度的胃癌间质液培养胃癌细胞,各组OD值差异有统计学意义(P＜0.05),在时间上存在浓度递增关系,SGC-7901胃癌细胞的浓度与所加入的肿瘤间质液浓度存在浓度的依赖性.连续培养72小时间质液组对SGC-7901肿瘤细胞可见明显增殖作用,高浓度组最明显；消痰散结方中药血清可明显抑制胃癌间质液(0.5g/ml,培养72h)对胃癌细胞的促生长作用,与对照组和空白药物血清组比较差异具有统计学意义(P＜0.01).胃癌间质液干预组裸鼠瘤重与空白组、生理盐水组裸鼠瘤重差异比较均有统计学意义(P＜0.05),空白组与生理盐水组两组间比较瘤重差异无统计学意义(P＞0.05).空白组及生理盐水组荷瘤裸鼠去瘤后净重与间质液干预组比较净重差异均有统计学意义(P＜0.05).胃癌间质液干预组与空白组、生理盐水组比较三组间皮下移植瘤中miR-21表达差异有统计学意义(P＜0.001,P=0.0001)胃癌间质液组miR-21表达明显高于生理盐水干预组及空白组.消痰散结方对SGC-7901人胃癌原位移植荷瘤的抑瘤率46.24％,化疗组的抑瘤率43.15％；消痰散结方组瘤重(1.198±0.344)与化疗组瘤重(1.267±0.425)差异无统计学意义(P＞0.05),均低于生理盐水组及模型组(P＜0.05).消痰散结方干预SGC-7901人胃癌裸鼠原位移植瘤对miR-21的表达影响表明,化疗组与空白组miR-21表达差异有统计学意义(P＜0.05),化疗组、消痰散结方组与生理盐水组比较miR-21表达差异均有统计学意义(P＜0.05).结论：消痰散结方中药血清可明显抑制胃癌间质液对胃癌细胞的促增殖作用；胃癌间质液(痰浊)能够促进皮下移植肿瘤的生长可能的作用机制是上调了肿瘤组织中miR-21的表达；消痰散结方能抑制SGC-7901人胃癌裸鼠原位移植肿瘤生长其可能的机制是降低了肿瘤组织中miR-21的表达.
痰浊 消痰散结方 SGC-7901 胃癌间质液 细胞间黏附分子-1 白细胞介素-8 miR-21
孙大志
海军军医大学附属长征医院中医科,上海200003
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2018-08-01（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）