广西眼镜蛇毒细胞毒素-1的分离纯化及其对HSC-LX2的选择性抑制作用
目的 通过层析法从广西眼镜蛇毒中分离得到电泳纯的细胞毒素-1(CTX-1),以人肝正常细胞(HL7702)为对照探索CTX-1对人肝星状细胞(HSC-LX2)的选择性抑制作用.方法 先后应用DEAE-Sepharose CL-6B阴离子交换层析、Spehadex G-50凝胶层析和Macro-prep High S阳离子交换层析来分离纯化CTX-1；以人肝正常细胞(HL7702)为对照,采用CCK-8法检测并比较不同浓度CTX-1对HSC-LX2细胞增殖的影响；采用流式细胞技术检测CTX-1诱导HSC-LX2细胞凋亡的作用；采用Western Blot检测CTX-1和PI3K/Akt通路抑制剂LY294002单用与联用对HSC-LX2细胞中PI3K/Akt信号通路的影响.结果 广西眼镜蛇毒粗毒冻干粉经三步层析,分离纯化获得电泳纯的CTX-1,分子量为9.498KDa.CTX-1对两种细胞的增殖有抑制作用,呈剂量依赖性,CTX-1抑制HSC-LX2细胞增殖的IC50为2.50 mg/L；抑制HL7702细胞增殖的IC50达到18.97mg/L.CTX-1诱导HSC-LX2细胞凋亡的最小浓度为2mg/L；诱导HL7702细胞凋亡的最小浓度为4mg/L.CTX-1降低HSC-LX2细胞中p-Akt表达水平,而对Akt的表达水平无明显影响.结论 CTX-1对HSC-LX2具有选择性抑制作用,其增殖抑制作用呈剂量依赖性；CTX-1可通过抑制PI3K/Akt信号通路的激活,促进LX2细胞凋亡.
细胞毒素-1 肝纤维化 眼镜蛇毒 分离纯化 增殖 凋亡
王秀男 张学荣 廖明 陶慧娟 陈荣芳
广西医科大学基础医学院,南宁,530021;广西医科大学蛇毒研究所,南宁,530021 广西医科大学蛇毒研究所,南宁,530021
国内会议
第十六届全国蛇伤大会、第五届全国蛇伤学术交流会暨全国中医毒蛇咬伤学术交流会
安徽黄山
中文
29-32
2018-10-01（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）