禽呼肠孤病毒σ3基因在烟草中的表达与鉴定
研究禽呼肠孤病毒S1基因编码的σ3基因在烟草中的表达及其表达产物的反应原性.根据GenBank中公布的禽呼肠孤毒株S1133的基因序列,设计特异引物扩增σ3基因,构建重组植物表达载体pBI121-σ3,热激法转化农杆菌EHA105感受态细胞,筛选含有重组质粒的pBI121-σ3的阳性工程菌株EHA105.采用农杆菌介导的叶盘法转化野生型烟草,卡那霉素筛选获得抗性植株.随后通过σ-3基因的特异引物,PCR方法初步筛选获得转σ3基因的烟草植株.进一步对阳性植株通过实时荧光定量PCR方法检测σ3基因在转基因烟草中的拷贝数.并通过Western-blotting方法对转基因烟草中表达的σ3融合蛋白的反应原性进行分析.结果成功地构建了植物表达载体pBI121-σ3，筛选获得低拷贝的转σ3基因的烟草，σ3融合蛋白能够在烟草中表达且具有相应的反应原性，为进一步研究σ3基因的功能和利用植物作为生物反应器生产σ盯3蛋白口服疫苗的研发奠定了基础。
禽呼肠孤病毒 σ3基因 烟草 基因表达 反应原性
王盛 谢芝勋 黄莉 谢丽基 邓显文 谢志勤 刘加波 罗思思 曾婷婷
广西壮族自治区兽医研究所/广西畜禽疫苗新技术重点实验室,南宁530001
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2015-11-06（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）