质谱检测器在重组蛋白质药物N-连接寡糖定性及定量分析中的应用
糖基化修饰是蛋白质的一种常见且复杂的翻译后修饰,在生物体内主要有介导生物活性、受体介导识别、提高蛋白质溶解度以及延长蛋白质半衰期和促进蛋白质构象稳定等功能.治疗性蛋白质药物中有许多属于糖基化修饰蛋白质,而”正确”的糖基化修饰使得蛋白质药物具有临床疗效.在细胞培养过程中,许多外界因素包括溶解氧、pH值、碳源以及温度都会影响蛋白质的糖基化修饰,特别是重组蛋白质药物较细胞本身蛋白质在细胞内往往属于高表达,这会影响酶或其他功能性蛋白质介导的糖基化修饰,因此细胞培养的环境主要决定了蛋白质药物的糖基化修饰类型及含量.蛋白质药物”不正确”的糖基化修饰在人体内容易产生免疫反应,会被免疫系统清除,从而降低药物的治疗效果,这类糖型主要包括高甘露糖(High Mannose)、α-半乳糖类寡糖(α1,3-galactose-β1,4-galactose-N-GlcNAc)和N-羟乙酰神经氨酸(NGNA).另外,对于治疗性抗体药物,唾液酸及岩藻糖含量也会影响抗体药物的ADCC及CDC活性.本摘要采用荧光标记试剂RapiFluor对释放的糖基进行衍生化标记,通过荧光检测器串联质谱检测器对不同治疗性蛋白质药物的N-连接寡糖进行快速分析.快速荧光标记N-连接寡糖试剂盒结合质谱检测器能够在2小时间内对蛋白质药物从N-连接糖释放、标记以及定性定量进行系统的分析,方便对细胞发酵过程工艺优化和监测.
蛋白质药物 N-连接寡糖 定量分析 质谱检测器
韩治国
沃特世科技(上海)有限公司北京实验中心
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西安
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289-293
2017-11-04（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）