载体蛋白介导的富含脯氨酸抗菌肽的生物合成
目的：探索载体蛋白EXG1介导的抗G菌的富含脯氨酸抗菌肽在酿酒酵母中的表达. 方法：利用PCR方法获得酿酒酵母1,3--葡聚糖外切酶(EXG1)基因,构建整合型表达质粒,转化酿酒酵母宿主菌W303-1b/ES△;转化子经筛选获得表达菌株,用Western blot检测目的蛋白的分泌表达并用催化4-硝基苯--D-吡喃葡萄糖苷(pNPG)水解显色法检测其酶活.利用SOE-PCR方法分别构建带有AGG、AGA1、AGA2和-Factor信号肽序列EXG1的整合型表达质粒,然后将4种重组质粒分别转化至酿酒酵母宿主菌W303-1b/ES△,研究不同信号肽对EXG1表达的影响.同样利用SOE-PCR方法分别构建抗菌肽PR39NG,PR39TNC和LL37取代EXG1的N-端Loop区的AGA1-EXG1整合型质粒,然后将3种重组质粒分别转化至酿酒酵母宿主菌W303-1b/ES△,用Western blot检测3种融合蛋白的分泌表达并测定酶活. 结果：在酿酒酵母成功地分泌表达EXG1且具有活性;信号肽AGG、AGA1和-Factor能较好地引导EXG1的分泌表达,其中导肽AGA1能促进细胞生长.3种融合蛋白均可分泌表达,且具有活性. 结论：本实验首次实现利用AGA1信号肽引导EXG1介导富含脯氨酸抗菌肽PR39NG、PR39TNC和LL37在酿酒酵母中分泌表达,为生物合成制备抗G菌的富含脯氨酸抗菌肽提供新的技术策略.
富含脯氨酸抗菌肽 生物合成 酿酒酵母 载体蛋白
田雷瑜 刘忞之 王伟
中国医学科学院、北京协和医学院药物研究所,天然药物活性物质与功能国家重点实验实验窒,北京100050
国内会议
西安
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966-978
2017-11-04（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）