HBx基因缺失突变对乙型肝炎病毒复制和转录的影响
目的：构建HBx基因缺失突变质粒pUC-HBV1.0.X7，研究HBx缺失对HBV复制和转录的影响。方法：以包含HBV全长基因组的野生型质粒pUC-HBV1.0为模板，用定点突变技术构建HBx基因缺失突变质粒pUC-HBV1.0X7，并酶切和DNA测序鉴定。用SapI单酶切这两种质粒，获得线性的野生型和HBx缺失突变型HBV基因组，经转染试剂PoLyJetTM Reagent介导分别瞬时转染到HepG2细胞中。在转染后各时间点Western blot检测HBx蛋白的表达，Southernblots和real-time PCR同时检测胞质DNA复制和胞核cccDNA的合成，real-time PCR定量HBV前基因组RNA(pgRNA)的转录。结果：在野生组中可检测到HBx蛋白的表达，而在HBx突变组中HBx蛋白的表达低于Westem blot的检测范围。两组中各时间点合成的cccDNA水平无统计学差异(P>0.05)。而在转染后96h HBx突变组中胞质DNA的复制和pgRNA的转录都分别比野生组减少50％～70％ (P<0.05)。结论：HBx缺失虽然不影响胞核HBV cccDNA的合成，但是它能下调胞质HBV DNA的复制和pgRNA的转录。
乙型肝炎病毒 HBV X蛋白 cccDNA基因 前基因组RNA 定点突变技术 基因转录
罗莉 何松 郭进军 罗娜 龚倩 雷宇
重庆医科大学附属第二医院消化內科 400010 重庆医科大学病毒性肝炎研究所 400010
国内会议
第八届全国肝脏疾病临床学术大会暨第四届中国-印度尼西亚肝病峰会
南宁
中文
67-71
2012-06-07（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）