脐血CD34+造血干/祖细胞在丝素膜上向内皮细胞分化的研究
目的:以人脐血CD34+造血干/祖细胞为种子细胞,探讨其体外分离、纯化、诱导扩增和分化为内皮细胞的可行性,以及丝素材料对其生长、粘附、分化等情况的影响。方法:采集新鲜脐血经抗凝处理及无菌包装,Ficoll密度梯度离心法得单个核细胞,磁珠分选方法(MACS)分离出CD34+单个核细胞,分别接种到经丝素蛋白膜(SF)和明胶包被的培养皿上,用含有内皮细胞生长因子(VEGF)和纤维细胞生长因子(bFGF)的M199培养基诱导分化,胞形态学观察D34+细胞生长情况,流式细胞仪检测诱导前后内皮细胞CD34,CD3l及vWF表型,电镜观察验证内皮细胞胞浆内的W-P小体,并比较不同材料上D34+细胞的贴壁率及向内皮细胞分化比率。结果:分离后的细胞中D34+细胞经流式细胞仪测定。细胞比例为(95.68±1.06)%。细胞形态学观察发现,SF组和明胶组D34+细胞培养2周细胞长满瓶底并达到增殖高峰,细胞呈“铺路石”状排列。经诱导培养10d后,SF组和明胶组内皮细胞表型CD31阳性率分别为(68.03±4.89)%和(68.89±3.58)%,培养140d后,两组细胞vWF阳性率均可达80%以上。透射电镜两组细胞胞浆内均可见内皮细胞的Weibel-Palade小体。CD34+细胞在明胶和SF上均可较快贴壁,平均贴壁率为90.8%和85.2%,同时两组内皮细胞的分化比率均能达到60%以上,无明显差异。结论:脐血D34+造血干/祖细胞在VEGF等细胞因子的诱导下有可能定向分化为内皮细胞,同时可用SF作为其向内皮细胞分化的支架材料,最终用于具有快速形成毛细血管网能力的组织化器官替代品。
脐血 CD34+造血干/祖细胞 诱导分化 内皮细胞 丝素材料
陈瑶 杨吉成 缪竞诚
苏州大学医学部细胞与分子生物学教研室 江苏苏州 215123
国内会议
银川
中文
149-155
2011-08-01(万方平台首次上网日期,不代表论文的发表时间)