刚地弓形虫热休克蛋白70编码基因的克隆表达和生物信息学分析
目的：克隆、表达和分析刚地弓形虫Mr70 000热休克蛋白(TgHSP7O)的部分编码基因。 方法：收集、纯化RH株弓形虫速殖子，提取总RNA;设计合成引物并引入Nde I和XhoI酶切位点，RT-PCR扩增目的编码基因，插入原核质粒pET3Oa中，经双酶切、PCR及测序鉴定阳性克隆;在大肠杆菌BL21/DE3中用异丙基-β-D-硫代半乳糖苷(IPTG)诱导表达，表达产物经SDS—PAGE进行鉴定，重组蛋白(r rgHSP7O)用Western blotting分析免疫原性，采用相关生物信息学软件对序列进行分析。 结果：从弓形虫RH株cDNA中扩增出495bp的TgHSP70的部分编码基因，并成功构建重组质粒pET3Oa(+)/TgHSP70;SDS-PAGE结果表明，目的基因在大肠杆菌BL21/DE3中高效表达。rTgHSP7O的相对分子量约19kDa，Western blotting显示其能被兔抗弓形虫免疫血清识别，生物信息学软件预测rTgHSP70存在多个功能位点和潜在的抗原决定簇。 结论：RH株刚地弓形虫热休克蛋白70可在原核表达系统中高效表达，该重组蛋白具有免疫原性及多个功能位点，可作为弓形虫疫苗的候选抗原。
刚地弓形虫 原核表达 生物信息学 热休克蛋白 免疫原性
孟晓丽 武云香 杨建一 殷国荣 向晨昱
山西医科大学寄生虫学教研室，山西 030001
国内会议
兰州
中文
69-73
2009-08-01（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）