抗轮状病毒G10血清型(LLR株)特异性单克隆抗体的制备与鉴定
目的：羊轮状病毒LLR株，血清型为G10P”12”，是兰州生物制品研究所研发的单价口服轮状病毒活疫苗。疫苗生产及制造规程中规定疫苗毒种的血清型检测的方法有：核酸探针杂交、中和试验或ELJSA分型法，其中基于型单抗的免疫学检测方法由于敏感、特异和快速成为首选。型单抗可以对不同血清型的病毒株进行分型鉴定，而获得具有高特异性的型单抗相对困难，从而限制了型单抗的应用。目前，在LLR株毒种的鉴定中，我国尚未建立基于型单抗的免疫学方法。因此，建立抗轮状病毒G10血清型特异性单克隆抗体杂交瘤细胞株，并鉴定单抗的特性，以便开展轮状病毒疫苗毒株血清型的鉴定或流行病学调查。 方法：以超速离心纯化的轮状病毒LLR株(血清型为G10)病毒抗原免疫BALB/c小鼠。将小鼠骨髓瘤细胞sp2/0与免疫小鼠的脾细胞融合，挑选出高效分泌抗LLR抗体的杂交瘤细胞阳性克隆，采用有限稀释法进行克隆化，得到抗LLR的杂交瘤细胞株;再以G1-G4 RV全病毒抗原筛选出分泌RV G10型特异性抗体的杂交瘤细胞，获得与G1-G4 RV无交叉反应、抗LLR抗体的杂交瘤细胞株，用常规免疫学方法鉴定。挑选其中能稳定分泌单抗的杂交瘤细胞株，用ELISA、细胞中和试验、免疫印迹和抗原识别表位分析等方法分析其分泌的单抗，获得G10血清型特异性单抗。应用S-200分子筛层析法纯化G10型单抗。 结果：筛选得到了5G5、1H1和7F6共3株可稳定分泌单抗的杂交瘤细胞株，均具有G10血清型特异性;3株单抗除7F6为IgGl/K型抗体，其余2株均为IgG2a/K型抗体;抗体效价均可达1：1×106:3株单抗分别识别3个抗原位点;相对亲和力从大到小依次排列为：1H1>7F6>5G5;Western blot显示5G5、1H1和7F6均识别相对分子量约为34kD的VP7蛋白;中和试验显示5G5、1H1和7F6单抗均有不同程度的中和活性;5e5和1H1均与G1-C4和G6血清型RV抗原无交叉反应。 结论：成功筛选出分泌高特异性的抗轮状病毒G10血清型抗体杂交瘤细胞系，该单克隆抗体，可用于G10血清型轮状病毒的分型检测或LLR毒株的鉴别。
轮状病毒 单克隆抗体 中和活性 血清型特异性 口服活疫苗 免疫学检测
鱼轲 魏至栋 李萍 蒋琳
兰州生物制品研究所,兰州 730046
国内会议
兰州
中文
196-201
2009-08-01（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）